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生命之吻红葡萄酒促进睡眠与抗辐射作用实验研究
摘要：
实验结果表明：
1. 对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的影响
与正常对照组相比较，SMZW各组小鼠睡眠百分率均有明显增加(P<0.01)，提示SMZW各剂量组均能协同阈下剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用。
2. 对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响
与正常对照组相比，SMZW各组小鼠睡眠潜伏期明显缩短(P<0.01)，小鼠睡眠时间显著延长(P<0.01)。提示SMZW各剂量组均能协同阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用，缩短小鼠睡眠潜伏期，延长小鼠睡眠时间。
3. 抗辐射实验
60Co-γ照射后，与模型组比较， SMZW组小鼠存活率有明显提高(P<0.05，P<0.01)；体重减轻缓慢，且后期有明显回升(P<0.05，P<0.01)；小鼠外周血白细胞总数均能明显升高 (P<0.05，P<0.01)；血红蛋白明显升高(P<0.05，P<0.01)，说明SMZW对辐射所致死亡、体重减轻、外周血白细胞总数下降、血红蛋白降低现象均较好的防护和促进恢复作用。
另外，SMZW各剂量组均可使受照小鼠胸腺、脾脏指数增加 (P<0.05，P<0.01)；血清SOD酶活性显著升高(P<0.05)；血清MDA的含量明显降低(P<0.05，P<0.01)，提示SMZW一定程度上减轻辐射所致的机体免疫机能下降，有利于辐射所致自由基清除，对电离辐射所造成的自由基损伤具有明显的保护作用，这可能是SMZW抗辐射作用的重要机理之一。
综上所述：生命之吻红葡萄酒（以下简称SMZW）具有一定的促进睡眠、抗辐射作用。
1. 实验目的
通过小鼠催眠、抗辐射实验验证生命之吻红葡萄酒促进睡眠、抗辐射作用。
2. 实验材料
2.1 产品及试剂
生命之吻红葡萄酒，由；
戊巴比妥钠，北京化学试剂公司，批号：040224；
SOD试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20051216；
MDA试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20051130；
2.2 动物
ICR种小鼠，18-22g，雌雄各半，由上海西普尔-必凯实验动物公司提供，生产许可证号：SCXK（沪）2003-0002；
2.3 仪器
7504紫外可见分光光度计，上海欣茂仪器有限公司；
FA2104型电子分析天平，上海天平仪器厂；
Fco-Tkci-C型同中心回转式60钴放疗机，山东新华医疗器械厂产，上海肿瘤医院物理放射室提供；
CD1700全自动血球计数仪，美国雅培仪器公司。
3. 实验条件及统计方法
3.1 实验条件
给药前后，实验动物分笼饲养，喂全价颗粒饲料（上海西普尔-必凯实验动物公司提供），自由饮水，室温23±2℃。
3.2 统计方法
计数资料数据以均数±标准差表示( ±S)，采用Student-t检验。计数资料实验数据用频数和百分数表示，采用秩和检验。
4. 实验方法和结果
4.1 对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的影响
取健康ICR小鼠70只，18-22g，雌雄各半，随机分成7组，即正常对照组（给予生理盐水）， SMZW100mg/ml组、200mg/ml组 、250mg/ml组、300mg/ml组、350mg/ml组、葡萄酒对照组。各组灌胃给药，20ml/kg，给药后45 min，腹腔注射戊巴比妥钠26mg/kg，观察小鼠发生睡眠只数。以注射戊巴比妥钠后15 min内翻正反射消失达1 min以上者确定为阳性，分别记录并比较各组动物入睡百分率。
| 表1 生命之吻红葡萄酒对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡只数的影响 |
| 组 别 剂 量 |
（mg/ml） |
动物数 |
入睡鼠数 |
睡眠百分数（%） |
| 正常对照组 |
- |
10 |
1 |
10 |
| SMZW |
100 |
10 |
7 |
70* * |
| SMZW |
200 |
10 |
5 |
50* * |
| SMZW |
250 |
10 |
7 |
70* * |
| SMZW |
300 |
10 |
6 |
60* * |
| SMZW |
350 |
10 |
8 |
80* * |
| 葡萄酒对照组 |
- |
10 |
6 |
60* * |
| 与正常对照组比较 * P<0.05，* *P<0.01 |
戊巴比妥钠为中枢抑制药，能产生镇静催眠作用，使小鼠翻正反射消失。选其阈下催眠量26 mg/kg (即90％以上动物不出现睡眠的剂量)与试药在同一动物身上合用,如试药具有中枢抑制作用，则可产生协同作用，提高动物的睡眠百分率。
实验结果表明，与正常对照组相比较，SMZW各组小鼠睡眠百分率均有明显增加(P<0.01)(见表1，图1)，提示SMZW各剂量组均能协同阈下剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用，未见明显的剂量依赖关系。
4.2 对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响
取健康ICR小鼠70只，18-22g，雌雄各半，随机分成7组，即正常对照组（给予生理盐水）， SMZW100mg/ml组、200mg/ml组 、250mg/ml组、300mg/ml组、350mg/ml组、葡萄酒对照组。各组灌胃给药，20ml/kg，给药后45 min，腹腔注射戊巴比妥钠35mg/kg，观察小鼠发生睡眠情况。翻正反射消失达1 min以上为进入睡眠标志，以动物注射戊巴比妥钠到翻正反射消失为睡眠潜伏期，以动物翻正反射消失至恢复为持续睡眠时间，观察并记录各组小鼠睡眠潜伏期和睡眠持续时间。
| 表3 生命之吻红葡萄酒对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响( ±S) |
| 组 别 |
剂 量 |
动物数 |
潜伏期
（min） |
睡眠时间
（min） |
| 正常对照组 |
- |
10 |
7.25±2.12 |
17±5.57 |
| SMZW |
100 |
10 |
3.62±1.60* * |
52.38±19.57* * |
| SMZW |
200 |
10 |
3.25±1.04* * |
50.12±15.27* * |
| SMZW |
250 |
10 |
3.12±1.55* * |
48.62±19.06* * |
| SMZW |
300 |
10 |
3.00±1.07* * |
54.86±22.34* * |
| SMZW |
350 |
10 |
2.75±1.28* * |
54.38±17.67* * |
| 葡萄酒对照组 |
- |
10 |
3.75±1.28* * |
47.71±14.84* * |
| 与对照组比较 * P<0.05，* *P<0.01 |
选择戊巴比妥钠剂量为催眠量35mg/kg(即动物均能产生翻正反射消失的剂量)，因此观察指标主要为睡眠潜伏期和维持睡眠时间。结果表明SMZW与正常对照组相比，睡眠潜伏期明显缩短(P<0.01)，小鼠睡眠时间显著延长(P<0.01)，有统计学意义。 组与对照组比较，小鼠睡眠时间明显长于对照组，有统计学意义(P<0．01)。 提示SMZW各剂量组均能协同阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用，缩短小鼠睡眠潜伏期，延长小鼠睡眠时间，且未见明显的剂量依赖关系。
4.3 抗辐射实验
取健康ICR小鼠80只，18-22g，雌雄各半，随机分成8组，即正常对照组、模型组、 SMZW100mg/ml组、200mg/ml组 、250mg/ml组、300mg/ml组、350mg/ml组、葡萄酒对照组。正常对照组及模型组给予生理盐水，其余各组给药，20ml/kg，连续灌胃给药15天，于给药第5天的45min后，除生理盐水对照组，其余小鼠均匀排列在有机玻璃制成的放射状鼠笼內，经60Co-γ射线全身一次性照射，总剂量为7Gy，照射小鼠与照射源的距离为80cm。各组继续灌胃10天，每天记录各鼠体重变化及存活率。于第15天末次给药45min后眼静脉丛取血，测定外周血常规及外周血清中SOD、MDA水平。实验结束脱颈处死动物，解剖取出胸腺、脾脏，分别称重，计算胸腺及脾脏指数。
| 表4 生命之吻红葡萄酒对60Co-γ射线照后小鼠存活率的影响 |
| 组 别 |
剂 量 |
动物数 |
存活数 |
存活率（%） |
| 正常对照组 |
- |
10 |
10 |
100 |
| 模型组 |
- |
10 |
6 |
60△△ |
| SMZW |
100 |
10 |
8 |
80 |
| SMZW |
200 |
10 |
8 |
80 |
| SMZW |
250 |
10 |
9 |
90* |
| SMZW |
300 |
10 |
9 |
90* |
| SMZW |
350 |
10 |
10 |
100** |
| 葡萄酒对照组 |
- |
10 |
8 |
80 |
| 与正常对照组比较 △P<0.05，△△P<0.01，与模型组比较 * P<0.05，* *P<0.01 |
60Co-γ照射10天后，模型组小鼠存活率为60% ，而SMZW 250mg/ml、300mg/ml、350mg/ml组小鼠存活率分别为90%、90%，100%，与模型组比较有明显提高(P<0.05，P<0.01)，可显著提高小鼠受照后平均存活时间，表明SMZW对照射小鼠具有良好的防治辐射损伤效果。
| 表5 生命之吻红葡萄酒对60Co-γ射线照后小鼠体重的影响( ±S) |
| 组 别 |
剂 量 |
天数 |
| 1 |
3 |
5 |
7 |
9 |
11 |
13 |
15 |
| 正常对照组 |
- |
19.42
±0.72 |
20.63
±0.99 |
21.65
±1.31 |
22.61
±1.41 |
23.02
±1.00 |
23.69
±0.94 |
24.24
±0.93 |
24.82
±1.32 |
| 模型组 |
- |
19.61
±1.21 |
21.48
±0.93 |
22.68
±1.18 |
17.71±
1.58△△ |
16.76±
1.10△△ |
16.08±
1.31△△ |
16.07±
1.52△△ |
16.37±
1.38△△ |
| SMZW |
100 |
19.74
±1.16 |
20.9
±1.07 |
22.2
±1.61 |
18.48
±2.29 |
17.58
±2.52 |
17.21
±1.65 |
17.6
±2.25 |
17.78
±2.33 |
| SMZW |
200 |
19.63
±1.09 |
20.62
±0.70 |
21.93
±0.60 |
19.20
±0.97 |
18.20
±1.71 |
17.93
±2.14 |
18.12±
1.67* |
18.22
±1.65 |
| SMZW |
250 |
20.05
±1.20 |
21.95
±1.45 |
23.23
±1.40 |
18.25
±1.13 |
17.40
±0.83 |
17.63
±1.32 |
17.72
±1.55 |
18.43±
1.73* |
| SMZW |
300 |
19.79
±0.95 |
20.64
±1.26 |
21.96
±1.41 |
18.91
±1.72 |
17.78
±1.52 |
17.91
±1.72* |
18.36±
1.51** |
18.69±
1.65** |
| SMZW |
350 |
19.9
±1.02 |
21.39
±0.94 |
22.50
±1.30 |
19.55
±2.70 |
18.82
±2.31 |
18.51
±2.24* |
18.80±
2.19** |
19.19±
2.02** |
| 葡萄酒对照组 |
- |
19.36
±1.23 |
20.18
±1.09 |
20.90
±0.92 |
16.46
±1.77 |
16.46
±1.44 |
16.74
±1.63 |
17.32
±1.31 |
17.58
±1.41 |
| 与正常对照组比较 △P<0.05，△△P<0.01，与模型组比较 * P<0.05，* *P<0.01 |
60Co-γ照射后，模型组小鼠体重显著下降（P<0.01）, 而SMZW 300mg/ml、350mg/ml剂量组小鼠体重减轻缓慢，且后期有所回升，与模型组比较，照射5天后即有明显提高(P<0.05，P<0.01)，表明SMZW对照射小鼠具有良好的防治辐射损伤效果。
| 表6 生命之吻红葡萄酒对60Co-γ射线照后小鼠外周血WBC、RBC、HGB的影响( ±S) |
| 组 别 |
剂 量 |
WBC
（109/L） |
RBC
（1012/L） |
HGB
（g/L） |
| 正常对照组 |
- |
8.90±2.91 |
7.10±1.93 |
84.8±9.36 |
| 模型组 |
- |
0.36±0.09△△ |
6.90±0.90 |
63.2±3.70△△ |
| SMZW |
100 |
0.52±0.11* |
6.96±1.07 |
72.0±6.16* |
| SMZW |
200 |
0.72±0.30* |
6.62±1.65 |
73.4±7.67* |
| SMZW |
250 |
0.64±0.22* |
7.36±1.66 |
73.8±3.96** |
| SMZW |
300 |
0.72±0.11** |
7.06±0.78 |
72.6±4.22** |
| SMZW |
350 |
0.76±0.17** |
7.20±1.53 |
74.0±4.18** |
| 葡萄酒对照组 |
- |
0.40±0.01 |
6.90±1.67 |
69.0±6.00 |
| 正常对照组比较 △P<0.05，△△P<0.01，与模型组比较 * P<0.05，* *P<0.01 |
60Co-γ射线照射后，小鼠外周血白细胞总数（WBC）明显下降，与正常组比较相差非常显著(P<0.01)，SMZW各剂量均能明显升高外周血白细胞总数(P<0.05，P<0.01)，表明SMZW对辐射所致WBC损伤有一定保护和促进恢复作用。
由表6可知，照射后各组红细胞总数（RBC）与模型组和正常组比较，均无显著差异。可能主要与RBC寿命较长，外周血短期损伤反应不明显有关。
60Co-γ照射后，模型组血红蛋白（Hb）与正常组比较显著差异(P<0.01)。SMZW各剂量均能明显升高血红蛋白(P<0.05，P<0.01)，说明SMZW具有较好的提高Hb作用，对辐射所致Hb损伤有较好的防护和促进恢复作用。
| 表7 生命之吻红葡萄酒对60Co-γ射线照后小鼠胸腺指数、脾指数的影响( ±S) |
| 组 别 |
剂 量 |
脾指数 |
胸腺指数 |
| 正常对照组 |
- |
4.86±1.29 |
2.47±0.60 |
| 模型组 |
- |
1.36±0.30△△ |
0.74±0.28△△ |
| SMZW |
100 |
2.05±0.77* |
1.02±0.34 |
| SMZW |
200 |
2.17±0.80* |
1.10±0.35* |
| SMZW |
250 |
2.55±1.35* |
1.32±0.63* |
| SMZW |
300 |
2.75±0.59** |
1.62±0.72* |
| SMZW |
350 |
2.95±0.69** |
1.82±0.68** |
| 葡萄酒对照组 |
- |
1.96±0.86 |
0.94±0.41 |
| 正常对照组比较 △P<0.05，△△P<0.01，与模型组比较 * P<0.05，* *P<0.01 |
由表7可知，与正常对照组比较，受照后各组小鼠胸腺、脾脏指数显著降低(P<0.01)，SMZW各剂量组均可使受照小鼠胸腺、脾脏指数增加，与照射对照组比较有显著性差异(P<0.05，P<0.01)，说明SMZW有一定程度使受照小鼠免疫器官重量回升作用，减轻辐射所致的机体免疫机能下降作用。
| 表8 生命之吻红葡萄酒对60Co-γ射线照后小鼠外周血清中SOD、MDA水平的影响( ±S) |
| 组 别 |
剂 量 |
SOD
（U/ml） |
MDA
（nmol/L） |
| 正常对照组 |
- |
71.64±1.18 |
4.87±0.13 |
| 模型组 |
- |
40.07±7.07 |
8.38±0.83 |
| SMZW |
100 |
53.02±6.64 |
6.84±0.52 |
| SMZW |
200 |
55.00±7.95 |
6.96±0.41 |
| SMZW |
250 |
56.33±7.09* |
6.41±1.02 |
| SMZW |
300 |
58.41±5.95* |
6.45±0.60* |
| SMZW |
350 |
61.71±6.74* |
5.73±0.20** |
| 葡萄酒对照组 |
- |
53.58±7.29 |
7.14±0.52 |
| 正常对照组比较 △P<0.05，△△P<0.01，与模型组比较 * P<0.05，* *P<0.01 |
电离辐射产生大量自由基，导致细胞内水解酶的释放、信号转导网络的改变和破坏，导致和加重辐射损伤。SOD是细胞中抗自由基损伤的重要物质，表8实验结果显示，受照后模型组SOD酶活性显著低于正常对照组，SMZW有一定的保护和提高SO D作用，能显著升高受照鼠血清SOD(P<0.05)，有利于辐射所致自由基清除，减轻细胞损害。
另外，电离辐射对生物体造成损伤的最重要的原因之一为生成外源性自由基，由于自由基的增加使体内生物氧化强度加强，产生大分子自由基，使正常组织的化学结构发生改变，从而损伤正常组织的形态与功能的完整性，使脂质过氧化产物丙二醛
含量增加。由表8结果可见，SMZW对受照后小鼠血清中丙二醛的含量有明显的抑制作用(P<0.05，P<0.01)，表明其对电离辐射所造成的自由基损伤具有明显的保护作用，这可能是SMZW抗辐射作用的重要机理之一。
5. 小结
实验结果表明：
4. 对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的影响
与正常对照组相比较，SMZW各组小鼠睡眠百分率均有明显增加(P<0.01)，提示SMZW各剂量组均能协同阈下剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用。
5. 对阈上剂量戊巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响
与正常对照组相比，SMZW各组小鼠睡眠潜伏期明显缩短(P<0.01)，小鼠睡眠时间显著延长(P<0.01)。提示SMZW各剂量组均能协同阈上剂量戊巴比妥钠镇静催眠作用，缩短小鼠睡眠潜伏期，延长小鼠睡眠时间。
6. 抗辐射实验
60Co-γ照射后，与模型组比较， SMZW组小鼠存活率有明显提高(P<0.05，P<0.01)；体重减轻缓慢，且后期有明显回升(P<0.05，P<0.01)；小鼠外周血白细胞总数均能明显升高 (P<0.05，P<0.01)；血红蛋白明显升高(P<0.05，P<0.01)，说明SMZW对辐射所致死亡、体重减轻、外周血白细胞总数下降、血红蛋白降低现象均较好的防护和促进恢复作用。
另外，SMZW各剂量组均可使受照小鼠胸腺、脾脏指数增加 (P<0.05，P<0.01)；血清SOD酶活性显著升高(P<0.05)；血清MDA的含量明显降低(P<0.05，P<0.01)，提示SMZW一定程度上减轻辐射所致的机体免疫机能下降，有利于辐射所致自由基清除，对电离辐射所造成的自由基损伤具有明显的保护作用，这可能是SMZW抗辐射作用的重要机理之一。
参考文献
1. 徐淑云，卞如濂，陈修主编，《药理实验方法学》，人民卫生出版社，北京，第二版，1991，P713 1165。
2. 冯全生，刘继林，黄国钧，等。补肝肾益气血方抗辐射损伤的实验研究。中药药理与临床。2003；19(3)：27-29。
3. 苗艳波，师海波，孙英莲，等。高山红景天的抗辐射作用。中药药理与临床。2004；20(3)：21-23
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